标题：Net decrease in spine-surface GluA1-containing AMPA receptors after post-learning sleep in the adult mouse cortex

译名：在学习后睡眠可使成年小鼠皮质后含有脊柱表面Glua1的含量减少。

作者：Miyamoto, D.等

时间：2021-05-17

期刊：Nature communications

影响因子：14.9

DOI：10.1038/s41467-021-23156-2

摘要：睡眠有益于学习和记忆的机制尚不清楚。睡眠可以进一步加强通过学习增强的突触，或促进广义突触减弱，同时保护新增强的突触。我们通过结合巩固与睡眠依赖的运动任务，突触AMPA受体可塑性的标志物以及重复的双光子成像来测试这些想法，以跟踪体内具有单脊柱分辨率的数百根脊柱。在小鼠运动皮层中，睡眠导致在学习之前和之后，脊柱表面含有GluA1的AMPA受体的整体净减少。学习后睡眠期间单棘的分子变化与睡眠后表现的变化相关。与睡眠剥夺相比，学习导致GluA1表达最大增加的棘刺在学习后睡眠后具有相对优势，因为睡眠会削弱所有剩余的脊柱。这些结果在成年小鼠中获得，表明睡眠依赖性突触向下选择也有利于大脑的成熟。

推荐语: 学习和诱导的增强与AMPA受体的数量和活性的持续增加有关。实现该过程的一个关键步骤是在突触后膜中掺入含GluA1的AMPA受体，本文中正是使用BEX CUY21进行小鼠胚胎的子宫电穿孔（E=14.5）以进行后续成像观察。

标题：Creation of CRISPR-based germline-genome-engineered mice without ex vivo handling of zygotes by i-GONAD

译名：无需离体处理受精卵通过i-GONAD创建基于CRISPR的基因组工程小鼠

作者：Gurumurthy Channabasavaiah B.等

时间：2019-07-24

期刊：Nature protocols

影响因子：13.4

DOI：10.1038/s41596-019-0187-x

摘要：创建基因工程小鼠的方法涉及三个主要步骤：从雌鼠中收获胚胎，将试剂显微注射到离体胚胎中，并将其手术转移到另一组雌鼠。三十多年来一直使用这些方法该创建小鼠模型。我们最近开发了一种名为GONAD（通过输卵管核酸递送进行基因组编辑）的方法，该方法绕过了这些步骤。在小鼠受孕后1.5 d将CRISPR组分（Cas9 mRNA和引导RNA（gRNA））注射到怀孕女性的输卵管中，然后进行体内电穿孔以将组分原位递送到受精卵中。使用GONAD，我们证明了靶基因可以在小鼠胚胎发育的不同阶段进行编辑。随后，我们通过递送CRISPR核糖核蛋白（RNPs;Cas9蛋白或Cpf1蛋白和gRNA）进入孕0.7天小鼠体内，这使得它适用于生成常规敲除和大缺失小鼠模型。当提供单链DNA（ssDNA）修复模板时，i-GONAD还可以生成包含高达1kb插入片段的敲入模型。i-GONAD还有其他优点：它不需要输精管切除术的雄性和假孕雌性，用于i-GONAD的雌性不会被牺牲，可用于其他实验，它可以很容易地在缺乏复杂显微注射设备的实验室中采用，并且可以由熟练的小动物手术但缺乏胚胎处理技能的研究人员实施。文中我们提供了用于建立i-GONAD的方法。

推荐语: CRISPR动物基因组工程广泛应用于研究中，该方法包括三个主要步骤：受精卵的分离，显微注射，以及将显微注射的受精卵转移到假怀孕雌性的输卵管中。GONAD技术使用CUY21直接输卵管上对受精卵进行原位电穿孔，生产基因组编辑小鼠，成功简化了CRISPR动物基因组工程的三大步骤。CUY21独特的恒流技术更是进一步保证实验的重复性及成功率。