外泌体，活细胞释放到细胞外微环境的磷脂双分子囊泡，其直径大小约为30~150nm。因天然外泌体内部富含脂质、蛋白质和核酸等物质的特性，近年来外泌体作为药物递送载体受到了越来越多研究者们的关注。研究表明外泌体可以作为载体，装载化合物、蛋白及核酸并递送至目标细胞。

与传统的基因载体相比，外泌体载体优势在于以下几个方面：

（1）外泌体作为内源性囊泡其免疫原性低;

（2）生物相容性结构使外泌体易于进入细胞提高药物递送效率;

（3）外泌体膜可保护治疗性核酸免受降解;

（4）外泌体可以避免吞噬作用和在体液中具有良好的耐受性;

（5）外泌体膜便于设计用于靶向递送。

外泌体作为天然载体的重要意义日益凸显，但是要实现高效、质量可控的载药外泌体的规模化生产，外泌体的包装技术是非常重要的一步。在包装的过程中需要在避免对外泌体的过度损伤的基础上尽可能提高封装效率。

CUY21EDITII电转仪通过对外泌体囊泡施加适当的电流击穿形成囊泡微孔, 药物通过形成微孔加载到外泌体中,外泌体膜随后会很快恢复完成封装。CUY21EDITII独特的动态衰减脉冲技术及恒流电阻测定技术使转染过程中电流输出更稳定,从而高效封装药物载入外泌体中。

下面我们来分享两篇2022年的文献，来解释CUY21EDITII的工作模式。

01
Milk exosomes-mediated miR-31-5p delivery accelerates diabetic wound healing through promoting angiogenesis

摘要：MicroRNA（miRNA）为关键生物过程中基因表达的重要调节剂，是糖尿病伤口治疗领域的一种有前途的核酸药物，但是因为缺乏有效的递送系统导致其miRNA疗法受到限制。实验中我们发现糖尿病小鼠伤口中miR-31-5p表达显著降低，同时相关研究表明miR-31-5p也具有促进内皮细胞的增殖，迁移和血管生成的作用，因此我们尝试使用牛奶来源的外泌体作为miR-31-5p递送系统对糖尿病伤口进行治疗。本研究通过电穿孔成功地将miR-31-5p模拟物封装到牛奶外泌体中，结果显示，负载在外泌体中的miR-31-5p实现了更高的细胞摄取并且能够抵抗降解。此外miRNA-外泌体制剂在体外显示出内皮细胞功能的显著改善可以促进血管生成和增强体内糖尿病伤口愈合。综合研究结果，牛奶外泌体作为可扩展生物相容性和具有成本效益的递送系统的可行性，可提高miRNA的生物利用度和功效。

方法:使用CUY21EDITII来进行miR-31-5p外泌体封装

图1：分离乳源性外泌体（mEXO）和制备miR-31-5p负载外泌体（mEXO-31）

图2：共聚焦图像显示miR-31-5p成功加载到mEXO中。红色和绿色荧光分别代表mEXO和FAM标记miR-31-5p模拟物

02

Optimization of siRNA loading into exosomes by electroporation

摘要：外泌体作为天然载体，作为一种副作用较少的药物递送工具受到关注。在这项研究中使用电穿孔将siRNA引入外泌体并优化转导的条件。我们使用 CUY21EDITII进行电穿孔，仪器可以输出高压瞬时击穿和低压驱动的组合，将siRNA萤光素酶引入A375细胞衍生的外泌体中，随后将外泌体添加到表达萤光素酶基因的细胞中，通过沉默细胞荧光素酶表达来确定外泌体包装情况。研究结果表明CUY21EDITII成功将siRNA引入外泌体，并可以引起相比对照组约50%的发光强度降低。

方法：使用CUY21EDITII 将siRNA电穿孔到从A375-luc2 细胞系中提取外泌体中。通过改变转染条件进行优化。

图3：使用CUY21EDIT II确定 siRNA 转染效率的最佳电压为150v

BEX电转化仪

CUY21EDITⅡ多模式高效基因电转化仪，可将外源基因高效导入到原代细胞等难转染细胞、细胞系、外泌体、受精卵、动物组织或器官中，不依赖于特殊的转染试剂即可实现高效转染，是一款真正的多模式，全功能基因电转化仪。

参考文献

[1].Yan C, Chen J, Wang C, et al. Milk exosomes-mediated miR-31-5p delivery accelerates diabetic wound healing through promoting angiogenesis. Drug Deliv. 2022 Dec;29(1):214-228. doi: 10.1080/10717544.2021.2023699. PMID: 34985397; PMCID: PMC874124.

[2]BEX日本分子生物学年会展

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